柱式病毒DNA提取试剂盒

产品货号：

BTN70701

中文名称：

柱式病毒DNA提取试剂盒

英文名称：

Virus DNA column extraction kit

产品规格：

50T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本制品是用于从血清(血浆)等液体样品及拭子(咽拭子、鼻拭子、口腔拭子、阴道拭子等)中提取微量病毒DNA的试剂盒。

产品特点

操作简单，整个过程只需要20分钟左右，不需要额外在洗柱液中补加乙醇。
灵敏度高，通过PCR检测到的最终灵敏度可以达到30～50拷贝/mL。
安全无毒，不需要使用苯酚和氯仿等有机溶液。
如果加上病毒离心富集步骤，最多可以处理1.5mL液体病毒样品。
与PCR和荧光PCR兼容。
价廉物美，性价比远高于国外同类产品。
适用于各种材料，包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清液等无细胞材料。

组分	规格
DNA病毒裂解液	30mL
上柱结合液	40mL
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50mL
DNA洗脱液3.0	10mL

保存：RT，其中DNA病毒裂解液需4℃保存，有效期1年。

使用方法

如果有N个样品，标记N+2个1.5～2mL螺旋盖塑料离心管，多出的一个为阳性对照，一个为阴性对照。为避免污染，建议不要使用压盖式塑料离心管。在每个管上做个标记，以在后续操作时区别向心面和离心面。然后在离心管中分别加入0.2mL液体样品（血清、血浆、尿液、脑脊液、唾液、眼泪等等），阳性对照和阴性对照。
- 如果是口腔拭子、咽喉拭子等各种拭子样品，则将拭子放入0.2mL自备生理盐水中挤压出液体，然后取0.2mL进行提取。
- 如果是粪便等半固定样品，则取约0.3mL的样品，加入0.3mL自备生理盐水，震荡重悬，离心取0.2mL上清进行提取。
- 如果血液，细胞培养液等含细胞的液体，可以离心用上清，也可以直接取用，但后者提取的病毒DNA中会有少量细胞的基因组DNA污染（但不影响PCR）。血浆的抗凝剂必须是EDTA或ACD，不能是肝素。使用ACD时由于所加入ACD会增加体积，样品会被稀释，得到的病毒滴度会比使用EDTA低15%左右。血浆最好按0.6mL/管的量分装保存，以避免反复冻融。
- 如果样品是实体组织或培养细胞，则需要在自备生理盐水中匀浆后离心，用0.2mL上清液（含病毒）进行提取，但此种情况下最后得到的病毒DNA不可避免的会含有少量基因组DNA污染（但不影响PCR检测）。
- 如果液体样品中的病毒需要富集，可以使用1.5mL上述方法得到的液体在4℃ 24000g冷冻离心60分钟，移弃1.3mL、用剩下的0.2mL继续操作。
加入0.6mL DNA病毒裂解液到各离心管中，振荡30秒混匀后室温放置10分钟裂解病毒。
- DNA病毒裂解液在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
加入0.8mL上柱结合液到离心管中，颠倒混匀后转移一半的混合液（0.8mL）到离心吸附柱中，室温放置2分钟。
12000rpm室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
将剩余的另外一半裂解液（0.8mL）转移到离心吸附柱中，室温放置2分钟。
12000rpm室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
加入0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000rpm室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
加入0.3mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000rpm室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。此为第二次洗涤，可以跳过。
12000rpm室温离心1分钟（干甩），弃含穿透液的离心管。
将干甩后的离心吸附柱套入到一个自备的RNase-free的1.5mL离心管中，在离心吸附柱的滤膜的中部加入30～100μL DNA洗脱液3.0，然后室温放置2分钟。
12000rpm室温离心1分钟，离心管中的溶液即为病毒DNA溶液。
DNA样品可以直接用于PCR，也可放-20℃长期保存。

提取液体样品/病毒核酸(RNA或DNA)为何很难？
原因一是量少。病毒颗粒中的RNA或DNA是作为遗传物质保存，每个病毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万种RNA分子，每种RNA有很多拷贝)，同时其长度也十分有限(一般不到细胞基因组的万分之一)，样品中病毒数往往又不是很多，使得样品中病毒核酸的绝对量往往比一个细胞中核酸的绝对量还少，所以操作中十分容易丢失。另外，由于得到的核酸绝对量很少，不能使用电泳和测OD检测，只能通过PCR或RT-PCR检测，而PCR或RT-PCR的条件又需要优化，所以要确定提取是否成功十分不容易。

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